悬浮细胞是指在培养基中没有任何附着基质，以自由悬浮生长的细胞。在进行细胞培养时，为了维持细胞的生长和增殖，需要定期将培养基中的营养物质和代谢废物进行换液。下面将介绍悬浮细胞的换液步骤及注意事项。

一、换液步骤

1. 准备工作

在进行悬浮细胞的换液前，需要做好准备工作，包括准备好新鲜的培养基、无菌的移液器、离心管等。

2. 去除旧培养基

将细胞培养瓶中的旧培养基倒掉，用PBS或无菌的生理盐水进行一次漂洗，去除细胞表面的未附着细胞和细胞代谢产物。

3. 加入新培养基

将新鲜的培养基加入细胞培养瓶中，通常是将培养基加入原来体积的一半，这样可以减少细胞的冲击和伤害。液面应该保持在原来的高度上。

4. 离心培养瓶

将细胞培养瓶放入离心机中，进行离心，一般速度为1000rpm，时间为5分钟。这样可以使细胞沉淀到底部，去除不良细胞和细胞碎片。

5. 倒掉上清液

将离心管中的上清液倒掉，留下底部的细胞沉淀。

6. 加入新培养基

将新的培养基加入离心管中，与细胞沉淀混合均匀。

7. 移液操作

使用无菌的移液器，将混合液移入细胞培养瓶中，液面应该保持在原来的高度上。

二、注意事项

1. 换液时间

悬浮细胞的换液时间一般为2-3天一次，但具体时间应该根据不同的细胞类型和生长状态来定。

2. 培养基的温度和pH值

在进行悬浮细胞的换液前，需要将新的培养基预热到37℃，同时pH值需要调整到适当的范围。

3. 移液器的消毒

在进行悬浮细胞的换液时，需要使用无菌的移液器，移液器的头部需要经过消毒处理，以避免细菌的污染。

4. 离心操作

在进行离心操作时，需要注意离心的时间和速度，过长或过快的离心会对细胞造成伤害。

5. 培养瓶的摆放

在进行细胞培养时，需要将培养瓶放在恒温箱中，保持适当的温度和湿度。

悬浮细胞的换液是细胞培养中重要的步骤，正确的操作可以保证细胞的健康生长和增殖。在进行换液时，需要注意各项操作细节和注意事项，以确保细胞的质量和数量。

文章出自：细胞实验外包   想了解更多请关注：http://www.dj-cro.com/